牛血清是重要的細胞培養添加成分，具有終止胰蛋白酶消化，提供細胞生長所需的貼壁因子、免疫球蛋白、胰島素等其他營養物質的作用。

根據采血時間的不同，牛血清通常分為：

• 胎牛血清（采自5-8月胎齡）

• 新生牛血清（采自出生0-7天內，也有說法是0-30天內）

• 小牛血清（采自出生30天-1年）

• 成牛血清（采自成牛）

理論上，優質的胎牛血清在細胞培養方面通常優于其他類型的血清， 與新生牛和小牛血清相比，各類生長因子含量更為豐富，且由于5-8月胎牛沒有形成完整的補體系統，因此在使用的時候無需熱滅活。

但是由于胎牛血清價格相對而言會更高一些，不同實驗對于血清的需求也不同，因此，如何挑選適合自己實驗的血清就顯得尤為重要。總的原則就是，綜合考慮各實驗室、生產企業的條件與所培養細胞類型。除了以往根據經驗和文獻報道，必要時也可進行針對特定細胞的血清篩選試驗，以篩選出最佳血清。

今天我們來分享一篇國內研究人員發表在《生物學雜志》上的標題為《不同類型牛血清對MDCK細胞培養效果研究》的文獻，該研究對進口胎牛血清、國產胎牛血清、國產新生牛血清在MDCK 細胞培養過程中的促生長效果進行了闡述。

文獻報道

研究方法

作者在含10%不同類型牛血清的DMEM 培養液中連續傳代培養MDCK 細胞，比較了三種血清培養MDCK細胞的傳代穩定性、最大増殖密度、倍增時間、比生長速率、貼壁率等指標。

1、貼壁培養傳代穩定性觀察

分別用含有10%A、B、C血清的DMEM培養基復蘇MDCK工作庫細胞，待細胞生長至致密單層時，分別用含有3種類型血清的DMEM培養基培養并連續傳代10代，傳代時細胞均按照1∶6比例，置于5%CO2、37 ℃培養箱中。每代細胞在24和48 h拍照觀察細胞形態、長勢及致密程度。

2、生長曲線及生長動力學分析

取第4代3種類型血清培養生長狀態良好且鋪滿單層的MDCK細胞，計數稀釋至1×10^4 個/mL，接種于24孔細胞培養板，每孔接1 mL細胞懸液。將24孔細胞培養板放置5%CO2、37 ℃培養箱中進行培養，每24 h消化3孔計數，計算平均值。按照此方法，對培養至第6代、第9代的MDCK細胞重復該試驗2次，計算3次平均值,繪制細胞生長曲線。并比較3種類型血清培養MDCK細胞的最大増殖密度、倍增時間、比生長速率和平均比生長速率。

3、貼壁率分析

取第4代、第6代和第9代3種類型血清培養生長狀態良好且鋪滿單層的MDCK細胞，按1.2.1所述方法將細胞稀釋至1×10^3個/mL，制成50 cells/4 mL的細胞懸液，在6孔細胞培養板中每孔加入4 mL的細胞懸液，并做平行3孔。將6孔細胞培養板放置5%CO2、37 ℃培養箱中培養8 d，出現集落后，用吸管吸去培養液，用PBS清洗，無水甲醇固定，結晶紫染色。觀察并對細胞集落計數,計算平均值。

4、細胞工廠擴大培養驗證

取第10代C血清培養生長狀態良好且鋪滿單層的MDCK細胞，消化后計數，擴大培養至1層細胞工廠連續傳3代，加150 mL細胞培養液,接種密度為(8～9)×10^4 個/mL，置5%CO2、37 ℃培養箱，用上述方法，接種10層細胞工廠，加1.5 L細胞培養液,接種密度為(8～9)×10^4個/mL，每12 h用細胞工廠觀察臺觀察,待細胞長成致密單層后，繼續傳代培養3代，觀察細胞生長情況并在長成致密單層時消化計數。

實驗結果

• 在最大增殖密度和倍增時間上，胎牛血清均優于新生牛血清。

• 在貼壁率方面［貼壁率(% ) = (所形成集落數/ 接種細胞數) ×100%］，進口胎牛血清略高于國產胎牛血清，差異顯著；國產新生牛血清低于國產和進口胎牛血清，差異極顯著。

總結

對于生產或研究所用的培養細胞，大多數情況下，生產或研究人員可以依據以往經驗以及文獻報道選擇合適的血清。在個別不確定的情況下，也可參考以上文章的方法進行最適血清的篩選。

參考文獻：

[1]李自良,王家敏,趙彩紅,王美皓,李倬,喬自林,馬忠仁.不同類型牛血清對MDCK細胞培養效果研究[J].生物學雜志,2020,37(04):21-25.

點擊文末閱讀原文，即可抵達相關文獻處。

好物推薦

Ausbian進口特級胎牛血清（澳洲血源），優勢：

1、精選內毒素更低批次（≤3EU/ml）。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩定供應品牌。

2、新批次在試用前，提供試用服務，養細胞更放心。

3、每個批次產量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優先鎖定，保證大多數項目兩年不需換批次，細胞試驗數據穩定。

4、每年按廠家生產順序，會有多批次平行供應，每個實驗室專屬批號管理，保證供貨穩定。

5、為Ausbian血清用戶免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類項目的申報提供支持。（同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學驗證等方面，提供更多免費延伸性技術幫助。）

6、針對特殊科研項目，可提供3-5個平行批次，讓試驗人有更多選擇空間。

7、為Ausbian血清提供免費代儲存服務，為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護，按要求隨時發貨。

8、Ausbian血清從出廠，到實驗室，全程低溫冷鏈保護，確保血清無反復凍融。

9、免費真品保障，每個血清瓶身加貼Viansaga®易破損防偽標簽，Ausbian品牌真品保護，逢假必究，為實驗室做好售后保障。

10、免費無憂售后，所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開始計算，一年之內，血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。

11、免費專業幫助，匯集近二十年，千萬個血清用戶細胞培養經驗，為各種細胞培養提供問題梳理分析，解決方案參考